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DuRed nucleic acid gel stain 10000× in water (效果同GelRed)

  • 商品编号:F009
  • 销 售 价:¥580.00
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详细说明书

产品参数

Name DuRed nucleic acid gel stain 10000× in water (效果同GelRed)
CAT#F009CAS#N/A
Storage4°C Refrigerated Shelf Life24 months
Ex (nm)304Em (nm)608
MWN/ASolventWater

产品介绍

DuRed 核酸染料(10,000× 水溶液)

 

DuRed核酸染料特点

1.    安全无毒:独特油性大分子使其不能穿透细胞膜进入细胞内,艾姆斯氏实验表明,该染料的诱变性远远小于EB

2.    灵敏度高:适用于各种大小片段的电泳染色,对核酸迁移的影响小于SYBR Green I

3.    稳定性高: 适用于使用微波或其它加热方法制备琼脂糖凝胶;室温下在酸或碱缓冲液中极其稳定,耐光性强。

4.    信噪比高:样品荧光信号强,背景信号低。

5.    操作简单:与 EB 一样,在预制胶和电泳过程中染料不降解;而电泳后染色过程也只需30 分钟且无需脱色或冲洗 ,即可直接用紫外凝胶透射仪观察。

6.    适用范围广:可选择电泳前染色(胶染法)或电泳后染色(泡染法);适用于琼脂糖凝胶或聚丙烯酰胺凝胶电泳;可用于 dsDNAssDNA RNA 染色。

7.    完美兼容:EB有相同的光谱特性,无需改变滤光片及观察装置:标准的 EB 滤光片或 SYBR 滤光片都适用,使用与观察EB相同的普通紫外凝胶透射仪观察即可,在 300nm 紫外光附近可得到最佳激发。

产品包装: 10,000x  DuRed Nucleic Acid Dye  500uL                   

储存条件: 2-8℃避光干燥可保存12个月。

操作步骤:

一.胶染法(推荐方法,用法类似EB

 制胶时加入DuRed 核酸染料(染料灵敏,每100mL 琼脂糖溶液中加入35μL DuRed 原装液即可)。 按照常规方法电泳。

1. 实验室材料和试剂:

(1) 实验样品:质粒DNADNA marker

(2) 试剂:TAE电泳缓冲液(Tris 24.2g,冰乙酸5.71mlEDTA 2.92g,NAOH 1.6g,PH8.0定容5000ml),溴酚蓝指示剂,1%的西班牙琼脂糖凝胶,DuRed核酸染料

(3) 仪器:电泳仪(100v),移液器(0.510ul),凝胶成像仪

2. 实验步骤:

(1) 制胶:将0.5g琼脂糖溶于50mLTAE电泳缓冲液中,加热至琼脂糖完全融化。将融好的琼脂糖溶液室温放置4050℃左右时加入12ulDuRed凝胶电泳染料,混匀。

(2) 倒胶:将制好的琼脂糖凝胶缓慢倒于制胶托盘内,避免产生气泡。将点样梳子垂直置于电泳胶膜的一端,距离托盘底部约1mm。放置时尽量保持平稳,切勿晃动。

(3) 置胶:待约20分钟左右胶体凝固后,缓慢垂直向上拔起点样梳子,切勿用力过猛。

(4) 将琼脂糖凝胶放入电泳槽内,加入电泳缓冲液,使电泳缓冲液液面高于凝胶面约12mm

(5) 将混合溴酚蓝指示剂的DNA样本(1ul溴酚蓝与2ul DNA标本混合)加入到点样孔内。

(6) 盖上电泳槽盖,开启电源,使DNA从负极移向正极恒压电泳(电压恒定在100120v之间,一般是5V/cm)

(7) DNA条带距离点样孔约12cm后关闭电源,(3040分钟)取出凝胶。

(8) 312nm 激发的 UV 凝胶成像系统观察结果。。

*注:此方法染色染料用量相对较少。500 μL染料大约可以做200500 50mL的胶。染料加入胶中可直接使用微波炉加热,制好的胶溶液可以在室温下保存直至用完。

优化电泳条件参考事项:

ü    要得到漂亮胶图与多种因素有关,需要在EB的基础上优化电泳条件,请尝试:marker浓度和样品浓度稀释一倍;降低琼脂糖浓度;选用更长的凝胶;降低电压延长凝胶时间以保证边缘清晰;改进上样技巧或选择泡染法染色。DuRed染料由于染料分子偏大,会对marker的大片段迁移有一定影响,偶尔会造成拖带,微笑条带等情况。减少DNA上样量。污染和微笑条带往往是过量的DNA样本造成的。推荐的泳道和已知浓度的样品的上样量为50-200ng/泳道。对于未知浓度的样品,尝试1/21/3的常用上样量;减少DulRed在凝胶中的总量,比如用0.5X的浓度来代替1X的浓度。 配制百分比浓度小的琼脂糖凝胶。高分子量的DNA在低百分比的琼脂糖凝胶分离效果比较好。

ü    更换电泳缓冲液。新配置的电泳液效果好! TBE缓冲液比TAE缓冲液的效果更好。

ü    染料过于灵敏,建议marker浓度稀释一倍,特别是含大片段多的marker!目前的marker是基于EB开发的,浓度对于DuRed一般是偏高的。

ü    染料过于灵敏,建议未知浓度的样品的稀释一倍后上样,特别是含大片段多的样品。

ü    EB相比,DuRed电泳电压要低一些(一般是5V/cm但是不绝对),跑胶的时间长一些。

ü    DuRed染料和样品混合后,点样到琼脂糖凝胶中,有时效果非常好,有时效果不好。

ü    由于DuRed具有良好的热稳定性,可以在热的琼脂糖溶液中直接添加,而不需要等待溶液冷却。摇晃,振荡或者翻转以保证染料充分混匀。也可以选择将DuRed储液加到琼脂糖粉末和电泳缓冲液中,然后用微波炉或其他常用方式加热以制备琼脂糖凝胶。DuRed兼容所有常用的电泳缓冲溶液。

ü    如果总是看到条带弥散或分离不理想,为了避免染料可能对DNA迁移的干扰,建议使用电泳后染胶。使用泡染法染色以确认问题是否与染料有关。如果染色后问题依旧存在,则说明问题与染料无关!

*此方法不适合预制聚丙烯酰胺凝胶,对于聚丙烯酰胺凝胶请使用泡染法。

二.泡染法

1)按照常规方法进行电泳。

2)用H2ODuRed 10,000× 储液稀释约3,300倍到0.1M NaCl中,制成染色液。(例如将15μL DuRed 10,000× 储液和5mL 1M NaCl加到45mL H2O中)。

3)将凝胶小心地放入合适的容器中,如聚丙烯容器中。缓慢加入足量的染色液浸没凝胶。室温振荡染色30min左右,最佳染色时间根据凝胶厚度以及琼脂糖浓度不同而略有不同。对于含3.510%丙烯酰胺的凝胶,染色时间通常介于30min1h,并随丙烯酰胺含量增加而延长。

4)用 312nm 激发的 UV 凝胶成像系统观察结果。

*注意事项:用泡染法染色时,染料用量较多。单次使用的染色液可重复使用3次左右;3× DuRed染色液可以大量制备,在室温下避光保存直至用完。

三.核酸电泳的PAGE步骤:

1)将TBE制备的凝胶放入电泳槽中,用夹子夹住边缘。

2)用配置凝胶溶液同一批次的5×TBE灌满缓冲液槽。用注射器排除凝胶底部的气泡。

3)用注射器吸取1×TBE冲洗加样孔。将DNA样品和适量的6×凝胶栽样缓冲液混合,用微量移液管加入加样孔。

4)将电极与电源相连(正极接下槽),打开电源一般90V18V/cm。进行电泳9h

5)电泳至标准参照染料迁移至所需位置(一般是电泳到二甲苯完全迁出,溴酚蓝距底边23cm停止)。关闭电源,拔掉插头,弃去电泳槽中的电泳液。

6)将凝胶取下来放入,染色皿中,加3X DuRed1X缓冲液中的振荡染色30-60分,放置在紫外检测即可。

*注意事项:与琼酯糖凝胶不同,不能用预染或点染的方法;只能用泡染的方法显色,由于聚丙烯酰胺比较致密,染料不容易深入,显色效果没有琼酯糖凝胶好。

 

特别提醒:

如果您使用的是紫外成像仪,请选择DuRed;如果您使用激光成像仪或希望在可见光下观测,请选择 DuGreen

少数情况下质粒经某些酶切后的DNA样品会出现拖尾和分辨率降低,建议尝试两种染色方法决定哪种方法更合适。

 

几种核酸染料比较

名称

灵敏度

稳定性

DNA迁移的影响

安全性

适用性

DuRed

条带不弯曲,DNA迁移小

独特的油性大分子,不易挥发升华,不易吸入人体,不能穿透细胞膜进入活体细胞内,安全无毒。艾姆斯氏测试结果表明,DuRed在凝胶染色浓度下完全没有诱变性,完全没有致癌毒性。

通用大小片段电泳染色,与EB有相同的光谱特性,无需改变滤光片及观察装置。标准的EBSybr Green滤光片都适用,使用普通紫外凝胶透射仪观察即可,在300nm紫外光附近可得到最佳激发。

DuGreen

条带不弯曲,DNA不迁移

独特的油性大分子,不易挥发升华,不易吸入人体,不能穿透细胞膜进入活体细胞内,安全无毒。艾姆斯氏测试结果表明,DuGreen在凝胶染色浓度下完全没有诱变性,完全没有致癌毒性。

通用大小片段电泳染色,适用于254nm激发的紫外凝胶透射仪或可见光凝胶透射仪。

Sybr

Green I

染料浓度高时

条带易弯曲

迁移现象明显

属花箐染料,能透过细胞膜进入活体细胞内,但容易生物降解,不会在体内残留,安全无毒。

100bp以上电泳染色,适用于使用254nm激发的紫外凝胶透射仪或可见光凝胶透射仪。

EB

条带不弯曲,DNA不迁移

分子量小,易挥发升华,易吸入人体,不易生物降解,在体内长期残留。艾姆斯氏测试表明,EB易引起有机体突变,是强诱变剂高致癌物。

100bp以上电泳染色,背景荧光信号高;使用普通紫外凝胶透射仪观察。

Goldview 

条带不弯曲,DNA不迁移

主要成分为吖啶橙,是一种煤焦油提取物,具有高毒,致癌,高诱变性。 易挥发升华,易吸入人体,能穿透细胞膜进入活体细胞内,不易生物降解,在体内长期残留。

100bp以上电泳染色,背景荧光信号高;适用于使用254nm激发的紫外凝胶透射仪或可见光凝胶透射仪观察。

 

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目录号

产品名称

规格

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