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Sybr Green I nucleic acid gel stain 10000× concentrate in DMSO* (Electrophoresis Grade)

  • 商品编号:001
  • 销 售 价:¥300.00-¥2400.00
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详细说明书

产品参数

Name Sybr Green I nucleic acid gel stain 10000× concentrate in DMSO* (Electrophoresis Grade)
CAT#001CAS#N/A
StorageDesiccated dark freezerShelf Life24 months
Ex (nm)497 Em (nm)525
MWN/ASolventDMSO

产品介绍

Sybr Green I 核酸染料

 此产品在国内由杜博士研发生产,因为 溶剂DMSO 溶点是 18.3,使用前请放置到室温充分溶解。

Sybr Green I  核酸染料特点:

1.    无毒性:花菁染料,无致癌毒性。

2.    高灵敏:紫外凝胶透射仪观测灵敏度高于 EB 染色法 5-10 倍,用可见光透射仪比紫外光条件下的灵敏度比 EB 染色法高20~30 倍。

3.    信噪比高:样品荧光信号强,无背景信号。

4.    操作简单:无须脱色或冲洗,即可用紫外凝胶透射仪观察或可见光透射仪观察。

5.    适用范围广:可适用于多种电泳分析,如琼脂糖凝胶电泳和 PAGE 凝胶电泳。

6.    使用方便:不影响其它修饰酶作用(如:Taq 酶、内切酶、T4 连接酶、反转录酶等)

7.    经济:价格比银染便宜。(例如:1ml 稀释10 倍,即是 10000µl可以使用 10000 次)。

Sybr Green I  核酸染料使用方法:

1.胶染法(用法同EB)(推荐方法,见图1)

1)       制胶时加入 Sybr Green I  核酸染料。冷却胶到 50左右,每 100ml 胶中加入10-50µl Sybr Green I 核酸染料(见图 1)。

2)       按照常规方法进行电泳即可。

3)       用紫外凝胶透射仪或可见光透射仪观测。蓝光可透过玻璃, 观测聚丙烯酰胺凝胶时,可直接将托有凝胶的玻璃平皿放入可见光透射仪内观测。

*注:此方法染色可以准确确定片段分子量,用量相对较少。1ml 染料可以做 100 10 ml 胶,每块胶点 50 个样,可以做 5000 次。

2.点染法(见图3) 

1)       方法适于琼脂糖凝胶电泳和PAGE凝胶电泳。

2)       工作液的配制:用电泳缓冲液将10000×Sybr Green I 稀释100倍,即为Sybr Green I 工作液。Sybr Green I 工作液可以置28℃保存一个月以上, 浓缩液在-20℃保存半年。

3)       制胶:按常规方法制胶,不含任何染料。

4)       样品染色:向分析样品中加入SUPER Green I 工作液和载样缓冲液,室温放置10分钟,使SUPER Green I 与样品中DNA充分结合。SUPER Green I 工作液加入量为总上样量的1/51/10

5)       DNA Marker染色:将5μL DNA Marker5μL DNA Marker稀释液和1μLSUPER Green I 工作液混匀,室温放置5分钟,使SUPER Green I DNA充分结合。

6)       上样、电泳:按常规操作。用紫外凝胶透射仪或可见光透射仪观测。蓝光可透过玻璃, 观测聚丙烯酰胺凝胶时,可直接将托有凝胶的玻璃平皿放入可见光透射仪内观测。

*注:用点染法染色时,灵敏度最高,染料用量最少。通常点一个样加入 1µL 可,可以使 10000 , 但大片段稍有滞后现象,如果需要更准确确定分子量(Marker 对比),建议使用胶染法。

3.泡染法

1)      按照常规方法进行制胶,其中不含任何染料。

2)       pH 7.0 - 8.5  的缓冲液(如:TAE, TBE),按照 11000 的比例稀释 Sybr Green I

3)      核酸染料,混匀,制成染色溶液。

4)      将染色溶液倒入合适的聚丙烯容器中,放入凝胶,用铝箔等盖住容器使染料避光。 室温振荡染色 10-30 分钟,染色时间因凝胶浓度和厚度而定。聚丙烯酰胺凝胶直 接在玻璃平皿上染色,将配好的稀释溶液轻轻地倒在胶板上,让稀释液均匀地覆 盖整个胶板,并染色 30 分钟。玻璃平皿必须预先经过硅烷化溶液处理(避免染料 吸附在玻璃表面上)。

5)      用紫外凝胶透射仪或可见光透射仪观测。蓝光可透过玻璃, 观测聚丙烯酰胺凝胶时,可直接将托有凝胶的玻璃平皿放入可见光透射仪内观测。

*注:用泡染方法染色时,可以精确确定核酸片段分子量。但染料用量是三种方法中 用量最大的。

几种染色方法特点比较:

染色方法            特点

灵敏度 染料用量 确定片段分子量精确度 胶染法 较高 较少 较高 点染法 很高 最少 大片段稍有滞后 泡染法 较高 最多 最高 点染+胶染法 最高 较多 大片段稍有滞后

 

Sybr Green I  核酸染料使用注意事项:

        1)       Sybr Green I 核酸染料样品点染方法,电泳时间不要超过 2 小时,否则 Sybr Green I核酸染料会从 DNA/RNA 上分离出来,会产生弥散状条带。

2)      用点染方法染色时,条带稍有滞后现象,如果需要确定片段精确分子量(和 Marker 对比),建议用胶染法和泡染法。

3)      常规用酒精沉淀核酸过程中,Sybr Green I  核酸染料可以全部从核酸上去掉。

4)      DNA电泳请选择 Sybr Green I 染料,RNA 电泳请选择 Sybr Green II染料,两种染料不通用。

5)      Sybr Green I 核酸染料对玻璃和非聚丙烯材料具有一定亲合力。建议在稀释、贮存、染 色等使用过程中用聚丙烯类容器。

6)       可以加Orange Red 作为标记. pH值在7.5-8.3之间,不要微波加热,加入热胶的温度低于50度.

Sybr Green I  核酸染料不同使用方法电泳图谱: